染料法PCR試劑盒的使用注意事項及操作條件的選擇說明
點擊次數(shù)：746 更新時間：2019-11-20
染料法PCR試劑盒的使用注意事項及操作條件的選擇說明
染料法PCR試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。
染料法PCR試劑盒的使用注意事項：
1、染料法PCR試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)后再測定，計算時請乘以總稀釋倍數(shù)。
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、染料法PCR試劑盒的底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
在進(jìn)行染料法PCR試劑盒實驗時，各項條件的選擇也是非常重要的：
1、固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚苯乙烯、纖維素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不論使用哪一種載體，在使用前進(jìn)行篩選：在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)的均一性如何，以此來判斷其吸附性能是否良好。
2、包被抗體的選擇：將抗體吸附在固相載體表面的時候，一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度，進(jìn)行包被后，當(dāng)其它試驗條件大致一樣的情況下，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇蛋白量少，OD值大的濃度。
