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通用PCR試劑盒無需常規(guī)核酸提取即可進行檢測
點擊次數(shù):553 更新時間:2021-04-14
  通用PCR試劑盒指的是在PCR進行的同時,對其過程進行監(jiān)測的能力(即實時)。因此,數(shù)據(jù)可在PCR擴增過程中,而非PCR結(jié)束之后,進行收集。這為基于PCR的DNA和RNA定量方法帶來了變革。
  在實時熒光定量PCR中,反應(yīng)以循環(huán)中檢測到目標(biāo)擴增的時間點為特征,而非在一定循環(huán)數(shù)后目標(biāo)分子素計的擴增量。目標(biāo)核酸的起始拷貝數(shù)越高,則會越快觀察到熒光的顯著增加。相反,終點法檢測(也稱“讀板檢測”)測量的是PCR循環(huán)結(jié)束時素計的PCR產(chǎn)物量。
  通用PCR試劑盒無需常規(guī)核酸提取,僅需對樣品進行簡單研磨、離心處理,即可開始后續(xù)核酸檢測。在保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提下,簡化了檢測步驟,將檢測時間縮短至不到1小時,成為適合于屠宰場、養(yǎng)殖場的技術(shù)。
  通用PCR試劑盒“變性-退火-延伸”三個步驟的實現(xiàn)方法是:
  1、變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;
  2、退火:退火也叫復(fù)性,模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,在這個溫度下,模板DNA單鏈能夠與引物的互補序列配對結(jié)合;所謂引物,是一段已經(jīng)確定好的DNA的片段,通過引物找到模板DNA的相應(yīng)位置,也就是確定了復(fù)制的起點;
  3、延伸:DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按照堿基互補配對原則和半保留復(fù)制原理,就能合成一條新的與模板DNA鏈互補的復(fù)制鏈。
  希望上述內(nèi)容能夠幫助大家更好的了解本試劑盒。
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